شناسایی ساختار مولکولی پروتئین غشاء تیلریا آنولاتا

author

Abstract:

 مقدمه و هدف: تشخیص متداول دو بیماری تیلریوز و بابزیوز در ایران بر اساس رنگ آمیزی گسترش ها ی خونی دامهای مشکوک با رنگ گیمسا می باشد. این نوع رنگ آمیزی بعنوان یک روش ساده ، ارزان و قابل استفاده در تمام آزمایشگاهها مطرح می باشد. اما از آنجایی که این رنگ آمیزی غیر اختصاصی است لذا تشخیص و تفکیک جنس و گونه اجرام انگلی بسیار مشکل و نیاز مند تجربه تخصصی بالا می باشد. برای مثال در بعضی موارد بعلت تشابه زیاد اجرام مختلف مانند بابزیا اویس و تیلریا لستوکاردی تمایز این دو جنس حتی برای افراد مجرب نیز می تواند مشکل ساز باشد. اخیرا در انسان گونه جدیدی از انگل های پیروپلاسمایی تحت عنوان WA1 مورد شناسایی قرار گرفته که از نظر ریخت شناسی با بابزیا میکروتی مشابه بوده اما از نظر بیولوژیکی و ژنتیکی از آن متفاوت و مشابه عوامل بیماریزای بابزیا ژیبسونی و حتی گونه های تیلریا نسبت به سایر اعضاء جنسهای بابزیا می باشد. جنس و گونه مذکور با استفاده از رنگ آمیزی با گیمسا ، قابل تفکیک نمی باشد در حالی که با استفاده از پادتن های اختصاصی قابل تفکیک و شناسایی می باشند. روش دیگری که برای تشخیص از مزایای بالایی برخوردار می باشد، روش تکثیر مکرر DNA (PCR) است. به منظور در اختیار داشتن آنتی ژن اختصاصی که توالی نوکلئوتیدی آن بتواند در امر تشخیص به روش PCR مورد استفاده قرار گیرد و همچنین توالی اسیدهای آمینه آن بتواند جهت ایمن سازی و تولید پادتن های اختصاصی مورد استفاده قرار گیرد، ژن پروتئین غشاء تیلریا آنولاتا (TaSp) در وکتور بیانی pQE-32 کلون گردید. مواد و روش کار: پس از استخراج mRNA از عقده لنفاوی و تولید cDNA، cDNA تولید شده با روش SMART-PCR مورد تکثیر قرار گرفت. سپس با آغازگرهای اختصاصی برای ژن غشاء تیلریا آنولاتا (TaSp)، cDNA این ژن تکثیر داده شد و در وکتور بیانی pQE-32 کلون و مورد تعیین توالی قرار گرفت. در پایان پروتیئن نوترکیب تولید و با روش Western blotting مورد ارزیابی قرار گرفت. نتایج وبحث: پس از استخراج RNA و تولید cDNA، توالی نوکلئوتیدی ژن TaSp با استفاده از روش RT-PCR تکثیر داده شد و در وکتور بیانی pQE-32 کلون و تعیین توالی گردید. با توجه به وجود ایزوله های مختلف در مناطق جغرافیایی و نیز تشابه عفونت ایجادشده توسط تیلریا لستوکاردی در گوسفند به تیلریا آنولاتا در گاو، در این مطالعه پس از تهیه توالی کد کننده پروتئین سطحی انگل تیلریا آنولاتا در ایزوله جدا شده از منطقه محمدشهر در حومه کرج، با شش توالی ثبت شده در بانک ژنتیک و همچنین توالی کد کننده پروتئین سطحی در تیلریا لستوکاردی مربوط به ایزوله فارس مورد مقایسه قرار گرفت. بیشترین تفاوت در توالی نوکلئوتیدی ناحیه کد کننده انتهای آمینی پروتئین سطحی در ایزوله مورد مطالعه(JQ003240) و توالی های تیلریا آنولاتا ایزوله آنکارا(AJ316249.1)، تیلریا چین 1 (AY274329.1)، تیلریا چین (DQ120058.1) و سه توالی ثبت شده در بانک ژنتیک مربوط به ایزوله های کرج (EF092920.1)، بوئین زهرا 1 (EF092921.1) و بوئین زهرا 2 (EF092922.1) دیده شد و مهمترین نکته مشاهده 12 نوکلئوتید از موقعیت نوکلئوتید شماره 66 تا 78 (نوکلئوتید شماره 378 از نوکلئوتید ابتدایی در توالی کامل نوکلئوتیدی کد کننده پروتئین سطحی تا نوکلئوتید شماره 390)بود که این 12 نوکلئوتید تنها در توالی ایزوله مورد بررسی (JQ003240) دیده شدند و در هیچ یک از شش توالی مورد مقایسه مشاهده نشد. همچنین توالی مورد مطالعه دارای 90% مشابهت نوکلئوتیدی با توالی مربوط به تیلریا لستوکاردی ایزوله فارس (AY274335.1) بود. پس از تهیه ردیف مقایسه ای نوکلئوتیدی ایزوله های مختلف، یک جفت پرایمر طراحی شد که تنها با استفاده از یک واکنش PCR بر روی نمونه DNA اخذ شده، با استفاده از تفاوت در توالی ژن پروتئین سطحی می توان در سطح گونه آلودگی به تیلریا به راحتی مورد تشخیص قرار گیرد.  

Upgrade to premium to download articles

Sign up to access the full text

Already have an account?login

similar resources

تشخیص تفریقی تیلریا لستوکاردی، تیلریا اویس و تیلریا آنولاتا در گوسفند با روش مولکولی PCR

زمینۀ مطالعه: تیلریوز گوسفندی یک بیماری تک‌یاخته‌ای مهم در گوسفند و بزها در مناطق گرمسیری و نیمه گرمسیری می‌باشد که باعث ضرر اقتصادی فراوانی در صنعت دام‌پروری می‌شود. هدف: هدف از این مطالعه، تشخیص تفریقی گونه‌های تیلریا در گوسفند با استفاده از روش PCR بود. روش‌کار: تعداد 200 نمونه خون گوسفند جهت تشخیص و تفریق گونه‌های تیلریا مورد بررسی قرار گرفتند. از نمونه‌های خون، استخراج DNA انجا...

full text

دستیابی به تهیه پروتئین نوترکیب تیلریا آنولاتا از بیوپسی عقده لنفاوی گوساله آلوده

 خلاصهتیلریا آنولاتا عامل تیلریوز در گاو از طریق کنه از حیوان آلوده به حیوان دیگر منتقل شده و سالانه خسارات اقتصادی زیادی را در صنعت دامداری وارد می‌سازد. در حال حاضر تنها راه پیشگیری این بیماری استفاده از واکسن تخفیف حدت یافته سلول‌های آلوده به ماکروشیزونت می‌باشد. بسیاری از محققین بدنبال دستیابی به واکسن نوترکیب می‌باشند که به علت سهولت در کاربرد و عدم ایجاد آلودگی، از مزیت بالاتری نسبت به وا...

full text

طراحی و به کارگیری تکنیک Semi-Nested PCR برای شناسایی تیلریا آنولاتا و تیلریا اورینتالیس در گاو

خلاصه بیماری تیلریوز ناشی از تیلریا آنولاتا، یکی از بیماری های مهم و خطرناک برخی کشورهای مناطق گرمسیری و تحت گرمسیری است که همه ساله در این مناطق و بویژه ایران، خسارات اقتصادی زیادی را در دامداری های صنعتی ایجاد می نماید. تاکنون گونه تیلریا آنولاتا با روش های مورفولوژی، سرولوژی و مولکولی از گاوهای ایران گزارش شده است، در حالی که گونه تیلریا اورینتالیس که به نظر می رسد گونه غیر پاتوژنی باشد، فقط...

full text

طراحی و به کارگیری تکنیک semi-nested pcr برای شناسایی تیلریا آنولاتا و تیلریا اورینتالیس در گاو

خلاصه بیماری تیلریوز ناشی از تیلریا آنولاتا، یکی از بیماری های مهم و خطرناک برخی کشورهای مناطق گرمسیری و تحت گرمسیری است که همه ساله در این مناطق و بویژه ایران، خسارات اقتصادی زیادی را در دامداری های صنعتی ایجاد می نماید. تاکنون گونه تیلریا آنولاتا با روش های مورفولوژی، سرولوژی و مولکولی از گاوهای ایران گزارش شده است، در حالی که گونه تیلریا اورینتالیس که به نظر می رسد گونه غیر پاتوژنی باشد، فقط...

full text

بررسی میزان آلودگی، ناقلین و شناسائی مولکولی تیلریا آنولاتا و تیلریا اورینتالیس در گاوان و گاومیشهای شمال غرب ایران

تیلریوزیس گرمسیری یک بیماری لنفوپرولیفراتیو پیشرونده در گاومیش و گاو می¬باشد که بوسیله تیلریا آنولاتا ایجاد می¬شود. تیلریا اورینتالیس در گروه تیلریاهای خوش¬خیم قرار دارد (تیلریا سرجنتی، تیلریا بوفلی و تیلریا اورینتالیس). تیلریوزیس خوش خیم گاو و گاومیش، دارای علائم بالینی ملایم یا بدون علائم می¬باشد. در این مطالعه 138 نمونه¬ی خون از گاومیش¬ها و 138 نمونه¬ی خون از گاوها جمع آوری و مورد آزمایش ق...

15 صفحه اول

My Resources

Save resource for easier access later

Save to my library Already added to my library

{@ msg_add @}


Journal title

volume 4  issue 1

pages  85- 85

publication date 2012-08-22

By following a journal you will be notified via email when a new issue of this journal is published.

Hosted on Doprax cloud platform doprax.com

copyright © 2015-2023